Pigmentos fotosintéticos
b) Separación de pigmentos vegetales por cromatografía sobre papel.
Elementos:
Mortero- Embudo cribado -Kitasato - Papel de filtro - Tubos de ensayo - Acetona - Éter de Petróleo - Hojas de espinaca o Acelga - Cloruro de Calcio- Bomba de vacío - Capilar o Pipeta Pasteur - Vaso de precipitado.
Objetivo:
Extraer los pigmentos fotosintéticos y separarlos mediante una técnica compleja de cromatografía en papel.
Técnica:
1. Lavar las hojas de espinacas o acelga, retirar los nervios y ponerlas en un mortero, junto con el solvente extractante (acetona).
Triturar la mezcla hasta que las hojas se decoloren y el disolvente adquiera un color verde intenso. Fotografía 1.
2. Filtrar con un embudo, papel de filtro y bomba de vacío. Fotografía 2
3. Pasar el filtrado en un tubo de ensayo, colocar 3 a 5 perlas de Cloruro de calcio. Dejar reposar de 5 a 10 min.
4. Tomar con un capilar o pipeta el sobrenadante del tubo anterior. Sobre un rectángulo de papel de filtro de unos 15 centímetros de ancho por 10 centímetros de alto doblado en V (para que se mantenga en pie) se traza con lápiz, una línea de siembra a 3 cm de la base. Sobre la línea se realizan de 5 a 8 pasadas con el capilar cargado de pigmento dejando entre cada pasada que se evapore acetona.
5. Se coloca el papel ya sembrado en un vaso de precipitado que contendrá el solvente separador (éter de petróleo), dejándolo unos 5 a 10 min.Fotografía3
6. Los pigmentos se irán separando según su adsorción o afinidad con el solvente. Fotografía 4
Fotografía 3
| 
Fotografía 4
|
Al observar el papel donde hemos hecho la cromatografía, vemos cuatro bandas o zonas (figura A), que corresponden a los distintos pigmentos fotosintéticos presentes en las hojas de espinaca. Según su grado de solubilidad con el éter de petróleo se reconocen estas bandas y en este orden:
· clorofila b
· clorofila a
· xantofila
· carotenos
| 
Figura A
|
Este es el aspecto final de la cromatografía obtenida con las hojas de espinacas o acelga
No hay comentarios:
Publicar un comentario