Bacteriófagos
El fago M13 es un bacteriófago filamentoso compuesto por una única molécula de ADN monocatenario circular la cual tiene aproximadamente 6407 nucleótidos de longitud; esta molécula se encuentra encapsulada en una cubierta proteica formada por aproximadamente 2700 copias de la proteína mayor de recubrimiento P8, y encapuchada en los extremos por cinco copias de dos diferentes proteínas de recubrimiento menores (P9, P6, P3). La proteína de recubrimiento menor P3 permite que el fago se una a un receptor presente en la punta de los pilli del hospedadorEscherichia coli. La infección con bacteriófagos filamentosos no es letal para las bacterias; sin embargo la infección causa placas turbias en los cultivos de E. coli. Aunque no se trata de un virus lítico, si se ha observado una disminución en la velocidad de reproducción de las células infectadas. Los plásmidos M13 llamadosfagémidos son utilizados en numerosos procesos de recombinación de ADN, y el virus ha sido estudiado por las posibles aplicaciones en nanoestructuras ynanotecnología de los principios que dominan su proceso de encapsulamiento.- .................................................:https://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Especial:Libro&bookcmd=download&collection_id=4d1df9c1a7b08dd0fe2eafd30414c9696747cc0f&writer=rdf2latex&return_to=Fago+M13
technologia phage display
Descripción detallada de la técnica phage display
Los fagos han sido una herramienta de estudio sencilla y versátil en la biología molecular. Smith demostró que el genoma de los fagos filamentosos podía ser manipulado con facilidad para ser utilizados en phage display (Elfos Scientiae 2004, Combinatoria Molecular, Nelson Santiago Vispo) convirtiéndose así en la herramienta más importante de la técnica phagedisplay.
Qué es fago o bacteriófago ?
Un fago o bacteriófago es un virus que infecta bacterias. El fago más comúnmente utilizado en phage display es el fago filamentoso como el Fd o M13. La familia de los fagos filamentosos pertenece al género de los Inovirus, que comprende una serie de bacteriófagos acoplados con el ADN en forma de simple cadena. Los fagos filamentosos infectan las cepas de E.coli que contengan el plásmido conjugativo F, a través de su unión al extremo del pilus y su translocación al citoplasma de la célula. El ensamblaje en la membrana de la célula de E.coli y la salida de las partículas virales no causan la lisis celular o muerte de la bacteria. Las bacterias infectadas continúan vivas; aunque su velocidad de crecimiento decrece.
Los fagos filamentoso tienen una morfología cilíndrica de 900 nm de largo por 6,5 nm de diámetro, y su cápsida está formada mayoritariamente por la proteína pVIII con alrededor de 2 700 copias por fago. En una de estas extremidades se encuentran tres o cinco copias de las proteínas menores pVII y pIX . Las dos proteínas forman uniones con las regiones correspondientes de la proteína pVIII. La región de pIX que llega hasta el extremo amino-terminal de la proteína pVIII tiene la función de estabilizar esta estructura desde el interior. Las proteínas pVI y pIII se encuentran en el extremo contrario de las proteínas pVII y pIX en el fago. Cada fago tiene 5 copias de cada de una de estas proteínas. La proteína pIII es responsable por la unión del fago al pilus de E.coli y así iniciar el proceso de infección de E.coli.
Concepto técnico de phage display
Phage display consiste en seleccionar péptidos, proteínas o anticuerpos de una gran población de fagos que exponen este tipo de moléculas en su superficie. Por ejemplo, para seleccionar anticuerpos de una gran población de fagos con distintos anticuerpos en sus superficies es necesario construir una genoteca de anticuerpos (librería o biblioteca de anticuerpos). Una genoteca de anticuerpos se construye clonando las fragmentos de ADN que codifican las regiones variables de la cadena pesada (VH) y la cadena ligera (VL) en un vector de phage display en fusión con la proteína pIII del fago. Los anticuerpos son fusionados a la pIII ya que los anticuerpos son expuestos de forma monovalente, es decir una copia de anticuerpo por fago. Los anticuerpos son presentados en forma de fragmentos ya que un anticuerpo completo causaría problemas de empaquetamiento del fago y problemas de expresión. Se han presentado fragmentos de anticuerpos en la superficie de fagos en formatos diferentes. Los formatos más utilizados son scFv (Nature 1990; 348:552-4) y Fab (Nucleic Acids Res 1991; 19:4133-7), aunque se han empleado otras variantes incluida dsFv (Nat Biotechnol Phage 1996; 14:1149-154). Los fragmentos Fab o scFv fusionados a la proteína pIII son empaquetados en la cápsida del fago, pero a través de reclonajes también pueden ser expresados en forma soluble (soluble Fab o sFab y soluble scFv), es decir, no fusionados a la proteína pIII.
La proteína pVIII del fago es utilizada para obtener una exposición multivalente de péptidos o proteínas, es decir, cuando se quiere expresar varias copias de una proteína o péptidos por fago, gracias al alto número de copias de la proteína pVIII. Este tipo de fusión sirve para una de las aplicaciones más importantes de la tecnología de presentación de péptidos y proteínas en la superficie de los bacteriófagos que es la construcción de bibliotecas peptídicas combinatorias. Péptidos, proteínas y anticuerpos pueden ser expresados en fusión con otras proteínas de la cápsida de los fagos que las proteínas pIII y pVIII, pero han demostrado ser menos eficiente ya que de una u otra forma afecta el empaquetamiento vírico. Los vectores con los fragmentos clonados en fusión con la proteína pIII o pVIII son transformados en células competentes de E. coli de la cepa TG1 ya que produce pili por lo tanto puede ser infectada por el fago M13.
Al tener fagos que presentan péptidos, proteínas o anticuerpos monoclonales en su superficie es necesario realizar pasos de selección llamado panning o biopanning para aislar aquellos fagos que presentan las moléculas de interés. El procedimiento de selección consiste en unir los fagos a una diana de interés inmovilizada en inmunotubos o acoplada a partículas magnéticas. Los fagos no adheridos son eliminados con varios lavados, posteriormente los fagos unidos son eluidos. Los fagos eluidos son utilizados para infectar E.coli para crear nuevas copias de fagos. La nueva población de fagos es utilizada para realizar nuevos pasos de selección. Comúnmente se realizan 3-5 pasos de selección. En cada paso la población de fagos con afinidad a la diana de interés se va enriqueciendo con clones con mayor afinidad a la diana y se van eliminando aquellos clones con menor afinidad a la diana de interés.
EL MATERIAL GENÉTICO ORGANIZADO SON LOS CROMOSOMAS
Ahora que ya conocemos la composición química, la estructura y algunas de las propiedades físio-químicas de los ácidos nucleicos, podemos iniciar el estudio de los cromosomas. Pero, antes es necesario definir ¿qué es un cromosoma?. El Cromosoma es el material genético organizado que varia en la escala evolutiva, pasando de moléculas de ácido nucleico lineal o circular encerradas en cápsides de virus, a largas moléculas de ADN doble hélice circular prácticamente desnudas y organizadas en dominios como en las bacterias, y a enormes moléculas de ADN que interaccionan con proteínas histónicas y no histónicas como en los eucariontes. Esta definición, incluye también los cromosomas de orgánulos citoplásmicos, como los presentes en mitocondrias y cloroplastos, y los pequeños cromosomas extra (ADN circular doble hélice) o plasmidios que se encuentran en bacterias.
Los virus pueden clasificarse atendiendo al tipo de organismo que parasitan en:
- Bacteriofagos o fagos: virus que parasitan a bacterias.
- Virus Animales.
- Virus vegetales.
El material hereditario de los virus está organizado en cromosomas de diferente tipo. Desde el punto de vista genético, los virus pueden clasificarse en virus ADN o ARN, doble hélice o hélice sencilla, y en circular o lineal.
- Virus cuyo material hereditario es ADN.
- Virus cuyo material hereditario es ARN.
- Virus cuyo material hereditario es ARN-ADN.
- Virus cuyo material hereditario es ADN-ARN.
| VIRUS ADN | |||
| Tipo de Molécula | Tipo de Hélice | Tipo de virus según huésped. | Familia de virus |
| Circular | Sencilla | Fago | ØX174M13 |
| Animal | Parvovirus | ||
| Doble | Animal |
Papovavirus (SV40, polioma)
Adenovirus
Herpetovirus (Herpes)
Poxvirus (viruela)
Iridovirus (peste porcina)
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| Lineal | Doble | Fago |
Extremos cohesivos: Fago l (Ø80, 434, P2, 186)
Redundancia terminal: serie T-par, T3 y T7
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De los virus anteriormente indicados, algunos han sido ampliamente estudiados genéticamente por distintos motivos. Por tanto, no está demás añadir algunos detalles sobre varios de estos virus.
- El virus ØX174 ha sido empleado ampliamente en estudios sobre la replicación del ADN. Este virus ADN tienen una cápside poliédrica que contiene en su interior una molécula de ADN circular de hélice sencilla (hebra +) con 5.400 nucleotidos. Cuando el virus infecta a E. coli pasa por una forma replicativa duplex, formándose una molécula circular doble hélice (una hebra+ y una hebra -). A partir de la hebra - de esta doble hélice se sintetiza el ARN mensajero del virus que se traducirá para producir las proteínas de la cápside. También a partir de la hebra - se sintetizan nuevas hélices de tipo + que se encapsularán dentro de las cápsides para originar nuevas partículas virales.
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- El bacteriofago M13 tiene una cápside de tipo filamentoso dentro de la cual se encuentra una molécula circular de ADN de hélice sencilla de 6.400 nucleotidos. Al igual que ØX174, también pasa por una forma replicativa dúplex.
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- El virus SV40 (Papovavirus) tiene una cápside icosaédrica que encierra en su interior un ADN circular doble hélice de 5.243 pares de nucleotidos. El ADN de SV40 se asocia con las proteínas histónicas de las células animales que infecta formando de 20 a 24 nucleosomas. El ADN del virus del polioma (Papovavirus) y ADN de los Adenovirus que también es circular de doble hélice, se asocia con las proteínas virales V y VII para formar una estructura similar a la de la cromatina de los organismos eucariontes. Los Adenovirus están siendo utilizados en experimentos de terapia génica.
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Otros virus conocidos, cuyo material hereditario es ADN doble hélice circular y que también infectan especies animales son los siguientes:
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- El fago l posee una cápside icosaédrica con una cola. Dentro de la cápside existe una molécula de ADN doble hélice lineal con 48.000 pares de bases aproximadamente. Una característica importante de este virus es que presenta extremos cohesivos, es decir, tiene dos extremos 5’ monocatenarios, formados cada uno por 12 nucleotidos que tienen una secuencia complementaria. Cuando infecta a E. coli lo primero que hace el fago l es circularizarse gracias a sus extremos cohesivos. Después de circularizarse puede seguir un ciclo lítico y lisar a E. coli o puede suceder que su ADN se integre en el ADN del cromosoma principal bacteriano. Cuando se replica el ADN del virus se forman concatémeros y una endonucleasa de restricción denominada ter reconoce una secuencía palindrómica y produce un corte a distinto nivel (asimétrico) en cada hélice que genera los extremos 5’ monocatenarios de 12 bases. El fago l ha sido muy utilizado en estudios de regulación génica, en concreto en el establecimiento del modelo del operón.
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- Los fagos de la serie T presentan una cápside icosaédrica con cola que encierra en su interior ADN doble hélice lineal (aproximadamente 166.000 pb). Los virus T pares (T2, T4 yT6) presentan permutaciones circulares y redundancia terminal. La redundancia terminal consiste en la repetición de una secuencia de 2.000 a 6.000 pares de nucleotidos en los dos extremos del virus. Por ejemplo, las secuencias AB se repiten en los extremos del virus: ABCDEFGHAB. Además, diferentes virus T4 muestran diferentes ordenaciones de sus genes (diferentes permutaciones circulares), un virus tiene la secuencia ABCDEFGHAB y otro tiene la secuencia CDEFGHABCD, pudiéndose encontrar otro que tenga la secuencia EFGHABCDEF. Cada cromosoma de un fago T4 es una permutación circular distinta de una secuencia común de nucleotidos (secuencia ABCDEFGH) y además terminalmente repetitivo con respecto a una región determinada. Por esta causa, los mapas genéticos en T4 resultan ser circulares, a pesar de tener como material hereditario ADN doble hélice lineal. Los virus T3 y T7 no presentan permutaciones circulares.
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| VIRUS ARN | |||
| Tipo de Molécula | Tipo de Hélice | Tipo de virus según huésped. | Familia de virus |
| Lineal | Sencilla | Fago | MS2, f2, Qb |
| Animal |
Picornavirus (polio)
Togavirus
Rhabdovirus (estomatitis, rabia)
Myxovirus (gripe)
Paramyxovirus (Sendai, paperas)
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| Vegetal |
Virus mosaico tabaco (TMV)
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| Doble | Fago | Ø6 | |
| Animal | Reovirus | ||
| Vegetal | Tumor de las heridas | ||
| Circular | Sencilla | Vegetal | Viroide (PSTV) |
- El bacteriofago MS2 tienen como material hereditario ARN lineal de una sóla hélice. MS2 es uno de los fagos más pequeños ya que posee sólo 3569 ribonucleotidos . Su ARN lleva información para tres proteínas: la replicasa, la proteína A y la proteína de la cubierta. Los ribonucleotidos que llevan la información para la proteína de la cubierta presentan secuencias de tipo palindrómico que permiten la aparición de horquillas o regiones de ARN doble hélice (autoapareamiento).
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- El virus Sendai (Paramyxovirus) tiene la propiedad de que puede fusionar células animales de distinto origen empleándose en la obtención de células híbridas somáticas ratón-humanas. Dichas células híbridas eliminan cromosomas humanos al azar y es posible establecer a partir de ellas líneas celulares que contienen todos los cromosomas de ratón y algunos cromosomas humanos. Estas líneas celulares híbridas ratón-humanas se utilizan para averiguar en qué cromosoma humano se localiza un determinado gen, o en qué cromosoma se localiza un determinado fragmento de ADN humano.
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Otro virus conocidos que infectan especies animales y cuyo material hereditario es ARN lineal de una hélice son los siguientes:
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- El virus del mosaico del tabaco (TMV) infecta a las plantas del Tabaco produciendo manchas necróticas en las hojas y pérdidas muy importantes en las cosechas. El TMV tiene una cápside cilíndrica formada por 2.130 capsómeros, siendo todos los capsoméros idénticos y estando constituidos por un polipéptido de 158 aminoácidos de longitud. Dichos capsómeros están dispuestos helicoidalmente dejando en el centro de la cápside un hueco donde se aloja el ARN de 6.400 ribonucleótidos de longitud y de una sola hélice de este virus.
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- Reovirus : su genoma está formado por 10 segmentos de ARN de doble hélice. Tienen una cápside icosaédrica poco usual que está formada por dos laminas. Su ARN no sirve como ARN-mensajero ni tampoco sirve de molde para producir ARN-mensajero, en el interior de la cápside existe una transcriptasa codificada por el genoma del virus. Cada uno de los segmentos de ARN del virus codifica para una proteína viral, al igual que sucede en el virus de la gripe.
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- Viroide PSTV (viroide del huso del tubérculo de la patata): son virus muy pequeños con genomas inusuales que carecen de cápside proteíca. Se han descrito en plantas y violan muchos de los principios establecidos para los virus animales. El genoma es ARN circular de hélice sencilla con una longitud que oscila entre 240 y 350 ribonucleótidos. Su pequeño cromosoma forma grandes regiones de doble hélice (autoapareamiento) que le protegen de la digestión con ribonucleasa (enzima que ataca a los ribonucleótidos sin aparear), además debido a su pequeño tamaño son resistentes a la inactivación mediante luz ultravioleta. Su secuencia carece de codones de iniciación (AUG) y los marcos de lectura abiertos poseen frecuentemente codones de terminación, de forma que no codifican para ninguna proteína. Por consiguiente, la replicación de su ARN depende de las enzimas presentes en las células vegetales a las que infecta.
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| VIRUS ARN-ADN | |||
| Tipo de Molécula | Tipo de Hélice | Tipo de virus según huésped. | Familia de virus |
| Lineal | Sencilla | Animal |
Retrovirus (Ribodesoxivirus)
- Sarcoma de Rous (Pollo)
- Leucemia de Rauscher (ratón)
- HIV (virus de inmunodeficiencia humana causante del SIDA)
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- Los Retrovirus (Ribodesoxivirus), productores de algunos tipos de cáncer, como el Sarcoma de Rous en los pollos o la Leucemia de Rauscher en los ratones, tienen como material hereditario dos segmentos de ARN con un coeficiente de sedimentacion 35S y en el interior de su cápside esférica se encuentra además una proteína llamada transcriptasa inversa. Los Retrovirus gracias a la transcriptasa inversa sintetizan ADN de doble hélice tomando como molde su ARN (transcripción inversa) durante el proceso de infección de las células animales. Posteriormente este ADN doble hélice producido por el virus se integra en el ADN de las células huésped. Los virus de inmunodeficiencia humana (HIV) que causan el SIDA pertenecen a esta misma familia o categoría. Su material hereditario es ARN, también llevan transcriptasa inversa en el interior de la cápside y dos moléculas de ARN. Poseen un genoma más complejo con al menos 7 genes. Al igual que en el caso anterior tiene lugar la transcripción inversa, la síntesis de ADN doble hélice a partir del ARN del virus y la integración del ADN sintetizado por el virus en el ADN de la célula humana infectada. Los virus de esta familia están siendo empleados en experimentos de terapia génica.
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| VIRUS ARN-ADN | |||
| Tipo de Molécula | Tipo de Hélice | Tipo de virus según huésped. | Familia de virus |
| Circular | Doble (gap) | Animal |
Hepatitis B
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- El virus de la Hepatitis B: Es un virus animal cuyo material hereditario es ADN circular de doble hélice, aunque realmente se trata de dos hélices sencillas lineales, la hélice de ADN+ (la más corta) y la hélice de ADN- (la más larga) que complementan formando una doble hélice circular dejando un hueco (gap) de hélice sencilla. Además dentro de la partícula viral existe una ADN polimerasa. Cuando infecta a las células animales su ADN se termina de convertir en doble hélice circular gracias a la ADN polimerasa y después se convierte en ADN doble hélice lineal que sirve de molde para producir una molécula de ARN- (pre-genoma del virus). La replicación del virus se realiza por transcripción inversa a partir del ARN- (pre-genoma). Por consiguiente, la replicación del virus necesita de la transcriptasa inversa que a partir del ARN- produce el ADN del virus. Por tanto, bajo este punto de vista el virus de la Hepatitis B es un Retrovirus.
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En algunos virus se han detectado proteínas de bajo peso molecular asociadas al ADN o ARN del virus, dichas proteínas se denominan VPg. Las proteínas VPg se han encontrado en virus vegetales y animales con ARN de una sola hélice (poliovirus) y en virus ADN de doble hélice como el Ø29 que infecta a la bacteria Bacillus subtilis, en adenovirus y en el virus de la Hepatitis B. En todos los casos, las proteínas VPg están unidas al ADN o ARN mediante un enlace fosfodiéster con la base del extremo 5' P, y juegan un papel en la iniciación de la replicación del virus.
La información hereditaria de las bacterias se encuentra fundamentalmente en un único cromosoma consistente en una molécula de ADN doble hélice circular. El tamaño de esta molécula varia según la especie bacteriana de 0,1 x 109 a 8 x 109 dalton. Una de las bacterias más estudiadas desde el punto de vista genético es Escherichia coli cuyo ADN mide 1.100 m de longitud y tiene 3.200.000 pares de nucleótidos.
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La circularidad del cromosoma de E. coli se demostró mediante estudios genéticos de construcción de mapas de tiempo mediante la técnica de la conjugación interrumpida (Jacob y Wollman, 1958). Sin embargo, la primera evidencia citológica de la circularidad del cromosoma de E. coli se obtuvo más tarde (Cairns, 1963) marcando radiactivamente el ADN, realizando una autorradiografía y analizando los resultados al microscopio óptico.
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La deshidratación requerida por las técnicas citológicas necesarias para la observación al microscopio electrónico de la organización cromosómica de las bacterias produce un desplegado o disgregación del nucleoide bacteriano que dificulta los análisis. Por esta causa, no ha sido posible determinar mediante microscopía electrónica la estructura del nucleoide bacteriano.
La extracción del nucleoide se realiza mediante un lisado de la pared celular con detergentes y lisozimas y posterior centrifugación en un gradiente de sucrosa. El 60 % del nucleoide es ADN, un 30 % es ARN (incluido el ARN producto de la transcripción), del 5 al 10 % es proteína (un 90% de la proteína corresponde a polipéptidos de la ARN polimerasa) y 1% son lípidos (probablemente contaminaciones de membrana).
El estado más o menos relajado, desplegado o disgregado del nucleoide bacteriano puede deducirse de su comportamiento después de ciertos tratamientos y posterior centrifugación en gradiente de sucrosa. Cuanto más compactado está el nucleoide menos viscoso es, menos rozamiento ofrece cuando migra en el tubo de centrifuga a través de la solución saturada de sucrosa y, por tanto, presenta una mayor velocidad de sedimentación. Cuanto más relajado o disgregado está el nucleoide más viscoso es, ofrece un mayor rozamiento en su migración y disminuye su velocidad de sedimentación.
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Cuando el nucleoide se trata con ARNasa, enzima que digiere específicamente ARN, la velocidad de sedimentación disminuye de 1.600 S a 160 S en una relación directa al tiempo de tratamiento con ARNasa.
El tratamiento con reactivos que disocian o degradan proteínas también produce un desplegado o relajamiento del ADN del nucleoide que se traduce también en una disminución de la velocidad de sedimentación. Este dato indicaría que también las proteínas podrían jugar un papel en el enrollamiento o plegamiento del nucleoide.
El tratamiento del nucleoide con bromuro de etidio produce también una disminución de la velocidad de sedimentación. Este cambio en la velocidad de sedimentación es típico de ADN superenrollado.
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Organización en dominios del nucleoide bacteriano
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Cuando se trata con ADNasa que produce roturas a nivel de una sola hélice, también se relaja la estructura y disminuye la velocidad de sedimentación, pero se necesitan muchas roturas para relajar todo el superenrollamiento del nucleoide. Este superenrollamiento del nucleoide se produce en parte por una cuestión de tipo mecánico. Si imaginamos dos cuerdas paralelas (cada una de las hebras de la doble hélice de ADN) y las enrollamos girando los extremos en sentido contrario (como si quisiéramos hacer una trenza, modelo estructural de la doble hélice) y, por último, unimos los extremos para forma un circulo, observaremos que debido a la tensión producida se forman inmediatamente nuevos superenrollamientos. Este resultado parece sugerir que el cromosoma de E. coli está formado por distintos dominios que a su vez están superenrollados. La rotura en una sola hélice de un dominio relajaría el superenrollamiento de ese dominio y no de los otros.
El número de dominios que se estima que existen en el cromosoma de E. coli es variable (12 a 80) y depende de las condiciones experimentales de aislamiento y purificación.
El papel del ARN en la estructura del nucleoide no esta claro, ya que se encuentra ARN mensajero (ARN-m), ARN transferente (ARN-t) y ARN ribosómico (ARN-r) unido al ADN mediante la ARN polimerasa. Se ha postulado que el ARN podría encontrarse en la base de los dominios estabilizándolos, sin embargo, algunos investigadores creen que la causa que mantiene estables los dominios no está identificada. De manera, que los dominios se mantendrían unidos en su base a través de fuerzas desconocidas.
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| Dominios e interacción del ADN con proteínas básicas |
Por último, en bacterias se han encontrado proteínas con características muy semejantes a las histonas de los organismos eucariontes. Por esta causa se piensa que estas proteínas podrían unirse al ADN y formar una especie de cromatina primitiva. Estas proteínas son las siguientes: la HU que es un dímero de subunidades diferentes y semejante a la histona H2B, la proteína H dímero de subunidades idénticas y semejante a la histona H2A, la proteína P semejante a las protaminas, la subunidad H1, el dímero HLP1 y el monómero HLP1.
| PROTEÍNAS BÁSICAS DETECTADAS EN BACTERIAS | |||
| Proteína | Composición | Contenido por células | Semejanza con eucariontes |
| HU | Dímero subunidades a y b de 9.000 d. | 40.000 dímeros | Histona H2A |
| H | Dímero subunidades idénticas de 28.000 d. | 30.000 dímero | Histona H2B |
| IHF | Subunidad a de 10.500 d. Subunidad b de 9.500 d. | Desconocido | Desconocida |
| H1 | Subunidad de 15.000 d. | 10.000 copias | Desconocida |
| HLP1 | Monómero de 15.000 d. | 20.000 copias | Desconocida |
| P | Sububnidad de 3.000 d. | Desconocido | Protaminas |
Además del cromosoma bacteriano principal (nucleoide) se han encontrado otras moléculas más pequeñas de ADN doble hélice circular que se replican de forma autónoma e independiente a la del cromosoma principal y que pueden, en algunas situaciones, integrarse en el cromosoma principal bacteriano y a partir de ese momento replicarse al mismo tiempo. Este tipo de material hereditario ha recibido el nombre de elementos genéticos extracromosómicos, queriendo indicar que están además del cromosoma principal. El tamaño de los plasmidios es muy variable (2.000 a 100.000 pares de bases) y el número de plasmidios que se encuentra en el interior de una bacteria es también variable y depende del tamaño del plasmidio, si los plasmidios son grandes suele haber u o dos copias por bacteria y si son pequeños pueden encontrarse hasta 20 copias por célula bacteriana.
Los plasmidios se pueden se clasifican según las funciones o el tipo de información que llevan en:
- Factores de Fertilidad o factores F.
- Factores de resistencia de transferencia a drogas, factores RTF o factores R.
- Factores colicinógenos, factores Col o factores Cf. Las colicilinas son sustancias que matan a las bacterias. Naturalmente las bacterias productoras de colicilinas son inmunes a ellas.
La capacidad de replicación autónoma de los plasmidios los ha convertido en vehículos para clonar genes o piezas de ADN. De forma que gracias a ellos es posible conseguir una gran cantidad del ADN deseado en poco tiempo.
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Otra característica importante es que tienen la capacidad de integrarse en distintos puntos del cromosoma bacteriano principal o en otros plasmidios. Esta movilidad se debe a la existencia en su interior de secuencias de inserción y transposones que les permiten cambiar de posición ciertos segmentos de su ADN e integrarlos en otras moléculas de ADN constituyendo elementos genéticos móviles.
El material hereditario se organiza en forma de cromosomas, los cromosomas son largas moléculas de ácidos nucleicos que en el caso de los virus interaccionan con las proteínas de la cápside para conseguir su plegamiento y empaquetamiento y, en algunos virus, además interaccionan con proteínas de bajo peso molecular (VPg) relacionadas con la replicación. También existen virus cuyo ADN se asocia con las histonas del huésped para formar nucleosomas.
El cromosoma principal bacteriano (nucleoide) es ADN doble hélice circular superenrollado y organizado en dominios o lazos, existiendo posiblemente interacciones con proteínas básicas semejantes a las histonas (HU y H) que sugieren la formación de una cromatina rudimentaria que permitiría su plegamiento y empaquetamiento en el interior de la bacteria.
El genoma de una especie está constituido por el conjunto las diferentes moléculas de ácido nucleico que posee, por ejemplo, existen virus con una sola molécula de ARN o ADN, con un sólo cromosoma (TMV, Adenovirus, T4, etc.), y hay virus que contienen varias moléculas de ARN o ADN , varios cromosomas (virus de la gripe, Reovirus, Retrovirus). El genoma de las bacterias puede estar constituido por más de un cromosoma, ya que además del cromosoma principal (nucleoide), pueden contener en su interior una o varias copias de cromosomas pequeños de ADN doble hélice circular (plasmidios o plasmidos).
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