introducción :
La histología es la rama de la anatomía que estudia a los tejidos de los animales y las plantas. Esta obra, sin embargo, se dedica a los tejidos animales, y de manera más específica a los del hombre. En su aspecto más amplio, el término histología se utiliza como si fuera sinónimo de la anatomía microscópica, porque su material abarca no solo la estructura microscópica de los tejidos, sino también los de las células, los órganos y los sistemas orgánicos.
Debe comprenderse que el cuerpo está estructurado por (a) células, (b) matriz intercelular y un líquido, el líquido tisular (líquido extracelular), que baña a estos componentes. El líquido tisular, que se deriva del plasma sanguíneo, transporta nutrientes, oxígeno, y moléculas de señalamiento a las células del cuerpo. A la inversa, las moléculas de señalamiento, los productos de desecho y el dióxido de carbono descargados por las células del cuerpo llegan a la sangre y a los vasos linfáticos en el liquido tisular. Este líquido, los mismo que gran parte de la matriz intercelular, no son visibles en las preparaciones histológicas ordinarias, pero aún así el estudiante de histología debe percatarse de su presencia invisible.
La histología ya no se dedica nada más a la estructura del cuerpo; sino también a su función . De hecho, el tema básico de la histología guarda una relación directa con otras disciplinas, y es esencial para la comprensión de ellas. Este texto, por tanto, se entremezcla con las disciplinas de biología celular, bioquímica, fisiología y, según se considere apropiado, patología. El estudiante reconocerá la importancia de este tema al referirse al texto más adelante en su carrera. Se pondrá de manifiesto un ejemplo excelente de esta relación cuando el lector se percate de la histología del riñón y observe que la histología intrincada y casi sublime de ese órgano (hasta llegar al nivel molecular) es la encargada de la capacidad para efectuar su función. Las alteraciones de la estructura del riñón serán la causa de gran número de trastornos que ponen en peligro la vida.
En lo que resta de este capítulo se hablara de los métodos que emplean los histólogos para estudiar la anatomía microscópica del cuerpo.
Microscopia de la luz
Etapas de la preparación tisular
Se han desarrollado diversas técnicas para preparar los tejidos para su estudio, de modo que se parezcan muy de cerca a su estado viviente natural. Las etapas son fijación, embebimientoen un medio adecuado, corte en rebanadas delgadas que permitan ver las características por transiluminación, montaje sobre una superficie para facilitar la manipulación y tinción a fin de que se puedan distinguir los diversos componentes tisulares y celulares.
Fijación
El término fijación se refiere al tratamiento del tejido con agentes químicos que no sólo retardan la aparición de alteraciones del tejido después de la muerte (o después de retirarlo del cuerpo), Sino que además conservan su estructura normal. Los agentes fijadores empleados con mayor frecuencia para la microscopia de la luz son formaldehído amortiguado neutro ylíquido fijador de Bouin. Ambas sustancias se fijan de manera cruzada con las proteínas, por lo que conservan una imagen del tejido como si estuviera vivo.
Deshidratación y aclaramiento
Como una gran parte de los tejidos consiste en agua, se utiliza una serie de baños en alcohol que se inician con la concentración de 50% y progresan en etapas graduadas de alcohol hasta la concentración de 100% para retirar toda el agua (deshidratación). A continuación el tejido se trata con xileno, sustancia química que se puede mezclar con parafina fundida. Este proceso se conoce como aclaramiento, puesto que el tejido se vuelve transparente por la acción del Xilol.
Embebimiento o infiltración
Con el objeto de distinguir las células sobrepuestas en un tejido y la matriz extracelular de otro, los tejidos deben embeberse en un medio apropiado, y a continuación, cortarse en rebanadas delgadas. Para la microscopia de la luz el método ordinario es parafina. Se coloca el tejido en un envase adecuado de parafina fundida hasta que quede totalmente infiltrado. Una vez que el tejido ha quedado impregnado de parafina, se coloca en un recipiente pequeño, se cubre con parafina fundida y, a continuación, se permite que ocurra el endurecimiento, con lo que se forma un bloque de parafina que contendrá el tejido.
Corte
Una vez que se rebajan los cortes del tejido para eliminar el material de embebimiento en exceso, se montan para el corte con un micrótomo. Este aparato está equipado con una hoja y un brazo que hace avanzar el bloque tisular en incrementos iguales específicos. Para la microscopia de luz el espesor de cada corte es de 5 a 10 micras (um).
Los cortes se pueden efectuar también en ejemplares congelados en nitrógeno líquido o sobre la barra de congelación rápida de crióstato. Estos cortes se montan en un medio de congelación rápida, y se cortan a temperaturas por debajo de los cero grados centígrados mediante una hoja de acero enfriada previamente. Los cortes se colocan en laminillas de vidrio también enfriadas de antemano, se permite que el montaje alcance la temperatura ambiental y se tiñe con colorantes especiales (o se tratan para histoquímica).
Montaje y tinción
Los cortes de parafina para la microscopia de luz ordinaria que se efectúan con hojas de acero inoxidable, se colocan (montan) sobre laminillas de vidrio (porta objetos) cubiertas con material adherente. Como muchos constituyentes tisulares tienen aproximadamente las mismas densidades ópticas, deben teñirse para microscopia de luz. La tinción para microscopia de luz se efectúa principalmente con colorantes hidrosolubles. Por tanto, primero se retira la parafina del corte y, a continuación, el tejido se rehidrata y se tiñe. Después de la tinción el corte se deshidrata una vez más de modo que pueda fijarse de manera permanente en el portaobjetos con un medio de montaje adecuado. El cubreobjetos no sólo protege al tejido del daño, sino que además se requiere para poder ver el corte con el microscopio.
Aunque existen varios tipos de tinciones que se han desarrollado para ver muchos componentes de las células y los tejidos, se pueden agrupar en tres clases: tinciones que distinguen entre los componentes ácidos, básicos de la célula; tinciones especializadas que distinguen a los componentes fibrosos de la matriz extracelular, y sales metálicas que se precipitan en los tejidos y forman depósitos metálicos en ellos.
La tinción empleada más a menudo en histología es la de hematoxilina y eosina, técnica a la que se hace frecuentemente referencia como H y E. La hematoxilina es una base que brinda un tinte azuloso preferencialmente a los componentes ácidos de la célula. Como la mayor parte de los componentes.
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