Especialidades médicas

Bioquímica clínica

El laboratorio clínico es el lugar donde los profesionales y técnicos en análisis clínicos, analizan muestras biológicas humanas que contribuyen al estudio, prevención, diagnóstico y tratamiento de las enfermedades. También se conoce como laboratorio de patología clínicay utiliza las metodologías de diversas disciplinas como la bioquímica- también llamada química clínica - hematología, inmunología y microbiología. En el laboratorio clínico se obtienen y se estudian muestras biológicas diversas, como sangre, orina, heces, líquido sinovial (articulaciones), líquido cefalorraquídeo, exudados faríngeos y vaginales, entre otros tipos de muestras.

A los laboratorios acuden pacientes externos, puesto que los exámenes que se requieren de los enfermos hospitalizados se hacen mediante muestras que se toman en las unidades de hospitalización. En consecuencia su ubicación será preferentemente en la planta baja, con fácil acceso a la sección de recepción del Archivo Clínico y en menor grado con el departamento de Consulta Externa.

Este servicio deberá ubicarse en relación cercana a los servicios de consulta externa, urgencias, terapia intensiva, quirófano y con fácil acceso hacia las áreas de hospitalización.

• Sala de espera y recepción. Donde los pacientes esperarán a ser atendidos, la atención se rige por orden de llegada.
• Cubículos de toma de muestras. En este punto se obtienen las muestras para luego ser analizadas mediante equipos especializados.
• Secciones de Laboratorio:
• Hematología: En este sección se efectúa el hemograma y diversas pruebas para evaluar los valores de los distintos componentes de la sangre.
• Bioquímica clínica: Aquí se realizan análisis que se clasifican de la siguiente forma:
  • Química sanguínea de rutina, lo que abarca múltiples parámetros como la determinación de glucosa, colesterol, etc.
  • Exámenes generales de orina
  • Determinación de gases en sangre (presión parcial de oxígeno, de anhidroacido carbónico, reserva de bicarbonato, PH, etc.)
• Microbiología: Las diversas labores que se realizan aquí pueden clasificarse en la siguiente forma.
• Coproparasitología: Tiene por objeto investigar la presencia de parásitos en materias fecales.
• Bacteriología: Consiste en examinar directa o indirectamente la presencia o actividad de organismos microscópicos en sangre,orina, materia fecal, jugo gástrico y exudados orgánicos.
• Inmunología: En esta sección se hacen determinaciones de anticuerpos y otras determinaciones con el fin de evaluar el sistema inmunitario
• Hormonas: En esta sección se analizan las diferentes hormonas con el fin de evaluar el sistema endocrino.
• Marcadores tumorales: En esta sección se analizan unos parámetros que aumentan o aparecen como parte de los procesos tumorales y que sirven para detectar los diferentes tipos de cáncer y su evaluación durante el tratamiento.

Las pruebas bioquímicas son una serie de análisis clínicos que sirven a la Medicina como apoyo a la hora de diagnosticar infecciones por bacterias.- ........................................................:http://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Especial:Libro&bookcmd=download&collection_id=dd46e5862590e49d39c0efbf43b6a021292360e0&writer=rdf2latex&return_to=Prueba+bioqu%C3%ADmica

Procedimiento:

Preparamos una mezcla de 0,1 ml. de CCC (caldo cerebro corazon) y 0,3 ml. de plasma de conejo en un tubo de ensayo previamente esterilizado. La muestra ya contiene cepas de St. Aureus. Tapamos el tubo de ensayo con algodón hidrofílico y lo llevamos a baño María a 37° C durante una hora, observando la muestra cada 15 minutos. Al completa la hora, sacamos las muestras y observamos sus resultados.

Resultados:

Estratificaremos los resultados en 4 distintos niveles:

1: pequeños coágulos no oganizados

2: pequeños coágulos oganizados

3: gran coágulo organizado

4: todo el contenido aparece coagulado y se mantiene cuando invierte el tubo.

Se consideran positivos los niveles 3 y 4.

(+) Staphylococcus aureus

( - ) Staphylococcus epidermis.

Prueba MIO (Motility-Indole-Ornitine ó Motilidad-Indol-Ornitina)

Esta prueba bioquímica permite identificar bacterias de acuerdo a su motilidad a la reacción de Indol a la descarboxilación de la ornitina.

Procedimiento:

Inocular en picada las cepas de micro organimos en el medio de cultivo e incubar por 24 horas a 37° .

Interpretación y Resultados:

Reacción	Interpretación
Enturbiamiento del Agar.	Hay movilidad
Agar transparente de- sarrollo solo en picada	No hay movilidad
Azul (alcalino)	Descarboxila ornitina
Coloración Amarilla (ácido)	No descarboxila
Rojo (anillos)	Indol (+)
Amarillo (anillos)	Indol ( - )

Prueba TSI (Triple Sugar Iron ó Triple Azúcar Hierro)

El TSI es un medio nutriente y diferencial que permite estudiar la capacidad de producción de ácido y gas a partir de glucosa, sacarosa y lactosa en un único medio. Tambien permite la identificación de la producción de SH2.

Esta es una prueba específica para la identificación a nivel de género en la familia Enterobacteriaceae, con objetivo de diferenciar entre:

• bacterias fermentadoras de la glucosa
• bacterias fermentadoras de la lactosa
• bacterias fermentadoras de sacarosa
• bacterias aerogénicas
• bacterias productoras de SH2 a partir de sustancias orgánicas que contengan azufre.

Prodedimiento:

Inocular los tubos de TSI con punta (alambre recto). Para eso introducir la punta hasta 3 a 5 mm. del fondo del tubo. Tras retirar el alambre del fondo, estriar el pico con un movimiento hacia uno y otro lado. Incubar a 35° durante 24 horas. Posteriormente se debe medir el pH de los cultivos.

Resultados:

• Pico alcalino/fondo alcalino : no hay fermentación de azucares. Característica de bactrias no fermentadoras como Pseudomonas sp.
• Pico alcalino/fondo ácido : Glucosa fermentada,lactosa ni sacarosa fermentadas. Shigella spp.
• Pico alcalino/fondo negro : Glucosa fermentada, ni lactosa ni sacarosa fermentadas, producción de ácido sulfhídrico. Salmonela spp.
• Pico ácido/fondo ácido: Glucosa y lactosa y/o sacarosa fermentadas. Puede producirse SH2 o no. Escherichia coli.

A estos resultados se les agrega el resultado de la producción de gas.

Prueba LIA (Lysine Iron Agar ó Agar Lisina Hierro)

Esta prueba permite diferenciar los microorganimos que producen descarboxilación o desaminación de la lisina. Se pude detectar ademas la produccion de SH2 y es más sensible que el TSI para la detección de SH2. Es muy utilizado par descartar Salmonella de aislamientos primaros.

Procedimiento:

Inocular en forma de estría las cepas de micro organimos en el medio de cultivo e incubar por 24 horas a 37° .

Interpretación y Resultados:

Reacción	Interpretación
Azul (alcalino)	Hay movilidad
Rojo	No hay movilidad
Engrecimiento	Descarboxila ornitina
Ruptura del Agar	No descarboxila
Fondo Amarillo y Tendido púrpura	Descarboxilación de lisina

Pruebas Bioquímicas IMViC:

Agar Citrato

La utilización de citrato como única fuente de carbono es una prueba útil en la identificación de enterobacterias. La utilización de citrato como única fuente de carbono se detecta en un medio de cultivo con citrato como única fuente de carbono mediante el crecimiento y la alcalinización del medio. Este aumento de pH se visualiza con el indicador azul de bromotimol que vira al alcalino a pH 7,6.

Procedimiento:

Se inocula el agar inclinado en una sola estría en el pico. Utilizar un cultivo de 24 horas en un medio sólido y cuidando no arrastrar medio de cultivo, ya que se pueden producir  falsos positivos por crecimiento a partir del medio de cultivo del inóculo. Incubar a 35°C durante 4 días. El ensayo es positivo cuando se observa crecimiento a lo largo de la estría, acompañado o no de un viraje del indicador al azul.

Resultados:

(+)Klebsiella spp.

( - ) Escherichia Coli

Indol

El indol es uno de los productos de degradación metabólica del aminoácido triptofano. Las bacterias que poseen la triptofanasa son capaces de hidrolizar y desaminar el triptofano con producción de indol, ácido pirúvico y amoníaco. La producción de indol es una característica importante para la identificación de muchas especies de microorganismos. La prueba de indol está basada en la formación de un complejo rojo cuando el indol reacciona con el grupo aldehído del p-dimetilaminobenzaldehído. Este es el principio activo de los reactivos de Kovacs y Ehrlich. El medio de cultivo utilizado debe ser rico en triptofano.

Procedimiento:

Inocular el caldo triptofano con el organismo en estudio e incubar a 35°C durante 18 a 24 horas. Al finalizar este período, añadir 5 gotas de reactivo de Kovacs por la pared interior del tubo. El desarrollo de un vivo color rojo fucsia en la interfase del reactivo y el caldo, segundos después de añadir el reactivo indica la presencia de indol y una prueba positiva.

Resultados:

(+) Escherichia coli

( - ) Klebsiella pneumoniae

Rojo Metilo

Una de las características taxonómicas que se utilizan para identificar los diferentes géneros de enterobacterias lo constituyen el tipo y la proporción de productos de fermentación que se originan por la fermentación de la glucosa. Se conocen 2 tipos generales: La fermentación ácido-mixta y la fermentación del 2,3 butanodiol. En la fermentación ácido mixta se forman fundamentalmente láctico, acético y succínico, además de etanol, H2 y CO2. En la vía del butanodiol se forman cantidades menores de ácido (acetato y succinato) y los principales productos son el butanodiol, etanol, H2 y CO2. 
El rojo de metilo es un indicador de pH con un intervalo entre 6,0 (amarillo) y 4,4 (rojo), que se utiliza para visualizar la producción de ácidos por la vía de fermentación ácido mixta.

Procedimiento:

Inocular el caldo Rojo Metilo con un cultivo puro de no más de 24 horas del microorganismo en estudio. Incubar a 35°C durante 48 horas. Luego de finalizado el tiempo de incubación agregar unas gotas del reactivo de rojo de metilo. La prueba es positiva si se desarrolla de un color rojo estable. Esto indica que la producción de ácido es suficiente para producir el viraje del indicador y el microorganismo fermentó la glucosa por la vía de ácido mixta. Un color anaranjado, intermedio entre el rojo y el amarillo no es considerado como positivo.

Resultados:

(+) Escherichia coli
( - ) Enterobacter aerogenes

Vogues Proskauer

En la prueba de Voges-Proskauer se determina la vía de fermentación del butanodiol descripta en la prueba de rojo de metilo. El acetil-metil-carbinol (o acetoína) es un producto intermediario en la producción de butanodiol. En medio alcalino y en presencia de oxígeno la acetoína es oxidada a diacetilo. Este se revela en presencia de alfa-naftol dando un color rojo-fucsia.

Procedimiento:

Inocular el caldo RMVP con un cultivo puro de no más de 24 horas del microorganismo en estudio. Incubar a 35°C durante 24 horas. Luego de finalizado el tiempo de incubación transferir 1 ml del caldo RM/VP a un tubo limpio y agregar 0,6 ml de alfa-naftol al 5% y 0,2 ml de KOH al 40%. Agitar el tubo cuidadosamente para exponer el medio al oxígeno atmosférico y dejarlo reposar durante 10 a 15 minutos. El desarrollo de un color rojo-fucsia  luego de 15 minutos indica la presencia de diacetilo, producto de oxidación de la acetoína y por lo tanto una prueba VP positiva.

Resultados:

(+) Enterobacter aerogenes

(-)Escherichia coli 

Microorganismos utilizados en las Pruebas Bioquímicas

MICROORGANISMO	FAMILIA	TINCION	FORMA	MOVILIDAD
PSEUDOMONA SPP.	ENTEROBACTER	GRAM -	BACILOS CORTOS, CURVADOS O RECTOS	POSEE FLAGELOS POLARES
SALMONELLA	ENTEROBACTER	GRAM -	BACILOS CORTOS	FLAGELOS PERÍTRICOS
SHIGUELLA SPP.	ENTEROBACTER	GRAM -	BASTONCILLOS	NO TIENE
ESCHERICHIA COLI	ENTEROBACTER	GRAM -	BACILOS CORTOS NO ESPORULADOS	FLAGELOS PERÍTRICOS
STAPHYLOCOCCUS AUREUS	MICROCACEAE	GRAM +	COCACEA	NO TIENE

Resultados Experimentales

Grupo 1: Sebastián Leyton - Carlos Vera

Grupo 2: Yuri Gálvez - David Fuica

Grupo 3: Graciela Quintero - Carolina

Grupo 4: Carolina Iribarra - Jessica Pizarro

Oxidasa

MICROORGANISMO	GRUPO 1	GRUPO 2	GRUPO 3	GRUPO 4
PSEUDOMONA SPP.	+	+	+	+
SALMONELLA	+	+	+	+
SHIGUELLA SPP.	-	-	-	-
ESCHERICHIA COLI	+	+	+	+
STAPHYLOCOCCUS AUREUS	-	-	-	-

Catalasa

MICROORGANISMO	GRUPO 1	GRUPO 2	GRUPO 3	GRUPO 4
PSEUDOMONA SPP.	+	+	+	+
SALMONELLA	+	+	+	+
SHIGUELLA SPP.	-	+	-	+
ESCHERICHIA COLI	+	+	+	+
STAPHYLOCOCCUS AUREUS	+	+	+	+

Coagulasa

MICROORGANISMO	GRUPO 1	GRUPO 2	GRUPO 3	GRUPO 4
STAPHYLOCOCCUS AUREUS	+	+	+	+

Indol

MICROORGANISMO	GRUPO 1	GRUPO 2	GRUPO 3	GRUPO 4
ESCHERICHIA COLI	+	+	+	+

Agar Citrato

MICROORGANISMO	GRUPO 1	GRUPO 2	GRUPO 3	GRUPO 4
ESCHERICHIA COLI	-	-	-	-

Vogues-Proskauer

MICROORGANISMO	GRUPO 1	GRUPO 2	GRUPO 3	GRUPO 4
ESCHERICHIA COLI	-	-	-	-

Rojo Metilo

MICROORGANISMO	GRUPO 1	GRUPO 2	GRUPO 3	GRUPO 4
ESCHERICHIA COLI	+	+	+	+

LIA

MICROORGANISMO(S) DETECTADO(S)	GRUPO 1	GRUPO 2	GRUPO 3	GRUPO 4
SALMONELLA	DESCARBOXILACION DE ORNITINA	DESCARBOXILACION DE ORNITINA	DESCARBOXILACION DE ORNITINA	DESCARBOXILACION DE ORNITINA
SHIGUELLA SPP.	DESCARBOXILACION DE LISINA	DESCARBOXILACION DE LISINA	DESCARBOXILACION DE LISINA	DESCARBOXILACION DE LISINA

MIO

MICROORGANISMO(S) DETECTADO(S)	GRUPO 1	GRUPO 2	GRUPO 3	GRUPO 4
PSEUDOMONA SPP.	DESCARBOXILACION DE ORNITINA	DESCARBOXILACION DE ORNITINA	DESCARBOXILACION DE ORNITINA	DESCARBOXILACION DE ORNITINA
ST. AUREUS	NO DESCARBOXILA ORNITINA	NO DESCARBOXILA ORNITINA	NO DESCARBOXILA ORNITINA	NO DESCARBOXILA ORNITINA

TSI

MICROORGANISMO(S) DETECTADO(S)	GRUPO 1	GRUPO 2	GRUPO 3	GRUPO 4
SALMONELLA	GLUCOSA FERMENTADA LACTOSA NI SACAROSA FERMENTADAS PRODUCCION DE ACIDO SULFHIDRICO	GLUCOSA FERMENTADA LACTOSA NI SACAROSA FERMENTADAS PRODUCCION DE ACIDO SULFHIDRICO	GLUCOSA FERMENTADA LACTOSA NI SACAROSA FERMENTADAS PRODUCCION DE ACIDO SULFHIDRICO	GLUCOSA FERMENTADA LACTOSA NI SACAROSA FERMENTADAS PRODUCCION DE ACIDO SULFHIDRICO
SHIGUELLA SPP.	GLUCOSA FERMENTADA LACTOSA NI SACAROSA FERMENTADAS	GLUCOSA FERMENTADA LACTOSA NI SACAROSA FERMENTADAS	GLUCOSA FERMENTADA LACTOSA NI SACAROSA FERMENTADAS	GLUCOSA FERMENTADA LACTOSA NI SACAROSA FERMENTADAS

Diagrama de flujo realización d