domingo, 21 de abril de 2019

QUÍMICA - MOLÉCULAS

MACROMOLÉCULAS - ADN

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ADN reticulado extraído del hígado de 4.000 años del antiguo sacerdote egipcio Nekht-Ankh.
El ADN antiguo (ADNAD) es un ADN aislado de especímenes antiguos [1] [2] Debido a los procesos de degradación (incluidos los enlaces cruzados, la desaminación y la fragmentación), el ADN antiguo es de menor calidad en comparación con el material genético moderno. [3]Incluso en las mejores condiciones de conservación, existe un límite superior de 0,4 a 1,5 millones de años para que una muestra contenga suficiente ADN para las tecnologías de secuenciación contemporáneas. [4] El material genético se ha recuperado de material esquelético arqueológico e histórico, tejidos momificados , colecciones de archivos de muestras médicas no congeladas, restos de plantas preservadas, hielo y permafrost. Núcleos así como sedimentos marinos y lacustres.





Historia de los estudios de ADN antiguo editar ]

1980s editar ]

El primer estudio de lo que se llamaría aDNA se llevó a cabo en 1984, cuando Russ Higuchi y sus colegas de la Universidad de California, Berkeley informaron que los rastros de ADN de una muestra de museo del Quagga no solo permanecieron en la muestra más de 150 años después. La muerte del individuo, pero podría extraerse y secuenciarse. [5] Durante los siguientes dos años, a través de investigaciones sobre especímenes naturales y artificialmente momificados, Svante Pääbo confirmó que este fenómeno no se limitaba a especímenes de museos relativamente recientes, sino que aparentemente podría replicarse en un rango de muestras humanas momificadas que se remontaban a Varios miles de años. [6]
Los procesos laboriosos que se requerían en ese momento para secuenciar dicho ADN (a través de la clonación bacteriana ) fueron un freno efectivo en el desarrollo del campo del ADN antiguo (ADNAD). Sin embargo, con el desarrollo de la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) a fines de la década de 1980, el campo comenzó a progresar rápidamente. [7] [8] La amplificación por PCR de doble cebador de aDNA (jump-PCR) puede producir artefactos de secuencia altamente sesgados y no auténticos. Se utilizó una estrategia de PCR anidada decebador múltiple para superar esas deficiencias.

1990s editar ]

La era posterior a la PCR anunció una ola de publicaciones, ya que numerosos grupos de investigación probaron el ADN. Pronto se publicaron una serie de hallazgos increíbles, que afirmaban que se podía extraer ADN auténtico de especímenes que tenían millones de años de antigüedad, en los reinos de lo que Lindahl (1993b) ha etiquetado como ADN de Antediluvian . [9] La mayoría de estas afirmaciones se basaron en la recuperación de ADN de organismos preservados en ámbar . Insectos como las abejas sin aguijón, [10] termitas, [11] y mosquitos de madera, [12] , así como las secuencias de plantas [13] y bacterianas [14] se extrajeron del ámbar dominicano que data delÉpoca oligocena . Fuentes aún más antiguas de gorgojos de color ámbar libanés , que datan de la época del Cretácico, según se informa, también produjeron ADN auténtico. [15] La recuperación de ADN no se limitó a ámbar.
Se investigaron con éxito varios restos de plantas conservadas en sedimentos que datan del Mioceno . [16]Luego, en 1994 y con reconocimiento internacional, Woodward et al. informó los resultados más emocionantes hasta la fecha [17] : las secuencias del citocromo B mitocondrial que aparentemente se extrajeron de huesos de dinosaurios que datan de hace más de 80 millones de años. Cuando en 1995 dos estudios adicionales informaron secuencias de ADN de dinosaurios extraídas de un huevo Cretácico, [18] parecía que el campo revolucionaría el conocimiento del pasado evolutivo de la Tierra. Incluso estas edades extraordinarias fueron superadas por la recuperación reclamada de secuencias halobacterianas de 250 millones de años de edad de halita . [19][20]
La secuenciación del genoma completo comenzó a dar resultados en 1995.

2000s editar ]

La amplificación con extensión de cebador único (abr. SPEX) se introdujo en 2007 para abordar el daño por modificación del ADN postmortem. [21]

Revolución ADN antiguo editar ]

Desde 2009, el campo de los estudios de aDNA ha sido revolucionado, con la introducción de técnicas de investigación mucho más baratas, lo que lleva a nuevas perspectivas en las migraciones humanas. [22]

Problemas y errores editar ]

Procesos de degradación editar ]

Debido a los procesos de degradación (incluidos los enlaces cruzados, la desaminación y la fragmentación), el ADN antiguo es de menor calidad en comparación con el material genético moderno. [3] Las características de daño y la capacidad de un ADN para sobrevivir a través del tiempo restringe los posibles análisis y establece un límite superior en la edad de las muestras exitosas. Allentoft et al. (2012). Existe una correlación teórica entre el tiempo y la degradación del ADN, [23] aunque las diferencias en las condiciones ambientales complican las cosas. Es improbable que las muestras sometidas a diferentes condiciones se alineen predeciblemente con una relación uniforme de degradación de la edad. [24] Los efectos ambientales pueden incluso importar después de la excavación, ya que las tasas de descomposición del ADN pueden aumentar, [25]Particularmente bajo condiciones de almacenamiento fluctuantes. [26] Incluso en las mejores condiciones de conservación, existe un límite superior de 0,4 a 1,5 millones de años para que una muestra contenga suficiente ADN para las tecnologías de secuenciación contemporáneas. [4]
La investigación sobre la descomposición del ADN mitocondrial y nuclear en los huesos de Moa ha modelado la degradación del ADN mitocondrial a una longitud promedio de 1 par de bases después de 6,830,000 años a -5 ° C. [27] La cinética de descomposición se ha medido mediante experimentos de envejecimiento acelerado que muestran la fuerte influencia de la temperatura de almacenamiento y la humedad en la descomposición del ADN. [28] El ADN nuclear se degrada al menos dos veces más rápido que el ADNmt. Como tal, los primeros estudios que informaron la recuperación de un ADN mucho más antiguo, por ejemplo de los restos de dinosaurios del Cretácico , pueden haber provenido de la contaminación de la muestra.

Límite de edad editar ]

Una revisión crítica de la literatura del ADN antiguo a través del desarrollo del campo destaca que pocos estudios después de aproximadamente 2002 han logrado amplificar el ADN de los restos de más de varios cientos de miles de años. [29] Una mayor apreciación de los riesgos de contaminación ambiental y los estudios sobre la estabilidad química del ADN han dado lugar a preocupaciones sobre los resultados informados anteriormente. Más tarde se reveló que el ADN del dinosaurio era un cromosoma Y humano, [30] mientras que el ADN reportado de halobacterias encapsuladas ha sido criticado por su similitud con las bacterias modernas, lo que sugiere una contaminación. [31]Un estudio de 2007 también sugiere que estas muestras de ADN bacteriano pueden no haber sobrevivido desde tiempos antiguos, sino que pueden ser el producto de una actividad metabólica de bajo nivel a largo plazo. [32]
aDNA puede contener un gran número de mutaciones postmortem , aumentando con el tiempo. Algunas regiones de polinucleotita son más susceptibles a esta degradación, por lo que los datos de secuencia pueden pasar por alto los filtros estadísticos utilizados para verificar la validez de los datos. [33] Debido a los errores de secuenciación, se debe tener mucho cuidado con la interpretación del tamaño de la población. [34] Lassustituciones resultantes de la desaminación de los residuos de citosina están ampliamente sobre representadas en las antiguas secuencias de ADN. La codificación incorrecta de C a T y de G a A representa la mayoría de los errores. [35]

Contaminación editar ]

Otro problema con las muestras de ADN antiguas es la contaminación por el ADN humano moderno y por el ADN microbiano (la mayoría de los cuales también son antiguos). [36] [37] En los últimos años, han surgido nuevos métodos para prevenir la posible contaminación de las muestras de ADN, incluida la realización de extracciones en condiciones extremadamente estériles, utilizando adaptadores especiales para identificar las moléculas endógenas de la muestra (sobre las que pueden haberse introducido durante el análisis) , y aplicando bioinformática a las secuencias resultantes basadas en lecturas conocidas en orden de tasas aproximadas de contaminación. [38]

ADN no humano editar ]

A pesar de los problemas asociados con el ADN 'antediluviano', ahora se ha publicado una amplia y creciente gama de secuencias de ADN a partir de una variedad de taxones de plantas y animales Los tejidos examinados incluyen restos de animales momificados artificial o naturalmente, [5] [39] hueso (cf Erika Hagelberg et al. 1989; Cooper et al. 1992; Hagelberg et al. 1994), [40] paleofeces, [41] [42] especímenes conservados en alcohol (Junqueira et al. 2002), semilleros de roedores, [43] restos de plantas secas (Goloubinoff et al. 1993; Dumolin-Lapegue et al.1999) y recientemente, extracciones de ADN animal y vegetal directamente de muestras de suelo . [44]
En junio de 2013, un grupo de investigadores anunció que habían secuenciado el ADN de un caballo de 560–780 mil años de edad, utilizando material extraído de un hueso de una pierna encontrado enterrado en el permafrosten el territorio de Yukon de Canadá [45]
En 2013, un equipo alemán reconstruyó el genoma mitocondrial de un Ursus deningeri con más de 300,000 años de antigüedad, lo que demuestra que el ADN antiguo auténtico puede conservarse durante cientos de miles de años fuera del permafrost . [46]
Los investigadores en 2016 midieron el ADN de cloroplasto en núcleos de sedimentos marinos y encontraron que el ADN de diatomeas se remonta a 1,4 millones de años. [47] Este ADN tuvo una vida media significativamente más larga que la investigación anterior, de hasta 15,000 años. El equipo de Kirkpatrick también encontró que el ADN solo decayó a lo largo de una tasa de vida media hasta unos 100 mil años, momento en el cual siguió una tasa de decaimiento de ley de poder más lenta. [47]

ADN humano editar ]

Debido al considerable interés antropológico , arqueológico y público dirigido a los restos humanos, han recibido considerable atención de la comunidad de ADN.

Fuentes editar ]

Debido a la conservación morfológica en las momias, muchos estudios de los años 1990 y 2000 utilizaron tejido momificado como fuente de ADN humano antiguo. Los ejemplos incluyen tanto los especímenes conservados naturalmente, como los conservados en hielo, como el Ötzi the Iceman (Handt et al. 1994), o mediante la rápida desecación , como las momias de gran altitud de los Andes (cf Pääbo 1986; Montiel et al. 2001), así como varias fuentes de tejido preservado artificialmente (como las momias tratadas químicamente del antiguo Egipto). [48]Sin embargo, los restos momificados son un recurso limitado. La mayoría de los estudios de ADNn humano se han centrado en extraer ADN de dos fuentes que son mucho más comunes en el registro arqueológico : los huesos y los dientes . Varias otras fuentes también han producido ADN, incluidos los paleofeces ( Poinar et al. 2001) y el cabello (Baker et al. 2001, Gilbert et al. 2004). La contaminación sigue siendo un problema importante cuando se trabaja con material humano antiguo.
El ADN patógeno antiguo se ha recuperado con éxito de muestras que datan de más de 5,000 años en humanos y hasta hace 17,000 años en otras especies. Además de las fuentes habituales de tejido, huesos y dientes momificados, dichos estudios también han examinado una variedad de otras muestras de tejido, incluida la pleura calcificada (Donoghue et al. 1998), tejido incrustado en parafina , [49] [50] y formalina. Tejido fijo. [51] Se han desarrollado herramientas computacionales eficientes para análisis de ADN y patógenos y microorganismos en pequeña ( QIIME ) y en gran escala ( FALCON [52] ).

Resultados editar ]

Sin embargo, al tomar medidas preventivas en su procedimiento contra dicha contaminación, un estudio de 2012 analizó muestras óseas de un grupo de neandertales en la cueva de El Sidrón, y descubrió nuevas perspectivas sobre el parentesco potencial y la diversidad genética a partir del ADNAD. [53] En noviembre de 2015, los científicos informaron que encontraron un diente de 110,000 años de antigüedad que contenía ADN de la hominina Denisovan , una especie extinta de humanos en el género Homo . [54] [55]
La investigación ha agregado nueva complejidad a la población de Eurasia. También ha revelado nueva información sobre los vínculos entre los ancestros de los asiáticos centrales y los pueblos indígenas de las Américas. En África, el ADN antiguo se degrada rápidamente debido al clima tropical más cálido, aunque, en septiembre de 2017, se han informado muestras de ADN antiguas, con una antigüedad de 8.100 años. [56]

Investigadores especializados en ADN antiguo editar ]













El sitio de unión de AP-1 , también conocido como sitio de promotor de AP-1, es una secuencia de ADN a la que pueden unirse los factores de transcripción de AP-1 . [1] El sitio de enlace AP-1, en humanos, tiene una secuencia de nucleótidos de ATGAGTCAT, donde A corresponde a adenina , T corresponde a timina , G corresponde a guanina y C corresponde a citosina .









El Sistema de Información Genética Artificialmente Expandida (AEGIS) es un experimento de análogo de ADN sintético que utiliza algunos pares de bases no naturales de los laboratorios de la Fundación para la Evolución Molecular Aplicada en Gainesville, Florida . AEGIS es un proyecto financiado por la NASA para tratar de comprender cómo se pudo haber desarrollado la vida extraterrestre . [1]
El sistema utiliza doce nucleobases diferentes en su código genético . Estas incluyen las cuatro nucleobases canónicas encontradas en el ADN ( adenina , citosina , guanina y timina ) más ocho nucleobases sintéticas ). [2] [3] [4] [5] [1] AEGIS incluye los pares de bases S : B , Z : P , V: J y K : X. 








El método de boom ( método de extracción de ácido nucleico de Boom) es un método de extracción en fase sólida para aislar ácido nucleico de una muestra biológica. Este método se caracteriza por "absorber los ácidos nucleicos (NA) a las perlas de sílice".

Descripción general editar ]

El método de auge (método de extracción de ácido nucleico de Boom) [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] [8] es un método de extracción en fase sólida para "aislar el ácido nucleico (NA) [notas 1 ] [9] a partir de muestras biológicas. Esencial de este método es el uso de perlas de sílice, capaces de unirse a la NA en presencia de una sustancia caotrópica según el efecto. Este método es uno de los más difundidos [6] [7] métodos para aislar ácidos nucleicos de muestras biológicas y se conoce como un método simple, rápido y confiable [2] para la purificación a pequeña escala de NA a partir de muestras biológicas.
Se dice que este método ha sido desarrollado e inventado por Willem R. Boom et al. alrededor de 1990. [notas 2]Sin embargo, el efecto caotrópico mencionado anteriormente ya se conocía y ya fue informado por Vogelstein y Gillespie [10] [notas 3] antes del desarrollo del método BOOM. Así que la contribución de Boom et al. puede ser la optimización del método para materiales de partida complejos, [1] como los fluidos corporales y otros materiales de partida biológicos, y proporciona un procedimiento de paso corto según Boom et al. US5234809. [1] Después de Boom et al. [1] se presentó, solicitudes similares [11] [12] [13] También han sido presentadas por otras partes.
En un sentido estrecho, la palabra "sílice" significa cristales de SiO 2 ; sin embargo, otras formas de partículas de sílice están disponibles. De acuerdo con este método, son adecuados especialmente el óxido de silicio amorfo y el polvo de vidrio, la alquilsilica, el silicato de aluminio ( zeolita ) o la sílice activada con -NH 2 , como material de fase sólida de unión a ácido nucleico. Hoy en día, los métodos de realización de Boom, caracterizados por "utilizar cuentas magnéticas (las cuentas de sílice son cuentas magnéticas)" se utilizan ampliamente. En tal método, las perlas de sílice son capturadas por un colector de perlas magnéticas, como la pipeta Tajima, [14] [15] [16] Pick pen (R), [3] [4] Colector de cuatro polos, [17] y así sucesivamente.

Procedimiento breve editar ]

Fig. 1: Método de boom con pipeta Tajima y bolas de sílice magnéticas. [14] La estructura esquemática de la pipeta Tajima se muestra en la Fig. 2. El aparato y los métodos [14] están destinados principalmente al sistema inmunológico. Sin embargo, una realización alternativa para el ensayo de extracción de ácidos nucleicos también se menciona en esta patente y el procedimiento de la Fig. 1 es generalmente similar al método Boom.
Fig. 2: Estructura esquemática de la pipeta Tajima.
El proceso para aislar el ácido nucleico del material de partida del método Boom consiste esencialmente en seguir los 4 pasos [1] [2] [3] [4](Ver Fig. 1).
(a) Lisar y / o homogeneizar el material de partida. 
El lisado del material de partida se obtiene, por ejemplo, mediante un detergente en presencia de enzimas degradantes de proteínas.
(b) Mezclar la sustancia caotrópica y las perlas de sílice en el material de partida. 
Mezclando el material de partida , una sustancia caotrópica para unir el NA a las perlas de sílice, el lisado del material de partida de (a) se mezcla con cantidades suficientemente grandes de sustancia caotrópica. Según el efecto caotrópico, la liberación de NA se unirá a las perlas de sílice casi instantáneamente. De esta manera, se forman complejos de sílice-ácido nucleico. Las razones por las que los enlaces de NA y sílice se forman se describen en la siguiente sección (Principios básicos).
(c) Lavado de perlas de sílice
En esta etapa, las perlas de sílice de (b) se lavan varias veces para eliminar los contaminantes. El proceso de lavado de los complejos de ácido nucleico de sílice (perlas de sílice) consiste típicamente en los siguientes pasos,
  • Recolección de perlas de sílice del líquido mediante, por ejemplo, una pipeta Tajima (ver Fig. 1, 2) o, por ejemplo, Pellet-down (mediante rápida sedimentación (centrifugación) y eliminación del sobrenadante (p. Ej., Bysuction))
  • Redispersión de perlas de sílice en el tampón de lavado que contiene sal caotrópica usando, por ejemplo, un mezclador de vórtice.
  • Recopilación de perlas de sílice redispersas de nuevo tampón de lavado mencionado anteriormente.
  • Luego se lava sucesivamente con una solución de alcohol-agua [notas 4] y con acetona.
  • Las perlas de secado se realizan preferentemente.
(d) Separación de los ácidos nucleicos unidos.
Separación de los ácidos nucleicos unidos de las perlas de sílice. Las NA puras se eluyen en tampón disminuyendo la concentración de sustancia caotrópica. El NA presentado en los complejos de ácido nucleico de sílice lavados (y preferiblemente secos) se eluye en un tampón de elución como el tampón TE, aguardiente acuoso, ... y así sucesivamente. La selección del tampón de elución está co-determinada por el uso contemplado del NA aislado.
De esta manera, las NA puras se aíslan del material de partida.
Mediante la alteración de la condición experimental, especialmente la alteración de la composición de los reactivos (sustancia caotrópica, tampón de lavado, etc.) podemos realizar un aislamiento más específico. Por ejemplo, algunas composiciones de reactivos son adecuadas para obtener ADN ds largo, algunas composiciones de reactivos son adecuadas para ARN ss corto, etc.
Los materiales de partida son, por ejemplo, sangre completa , suero sanguíneo , pelaje , orina , heces , líquido cefalorraquídeo , esperma , saliva , tejidos , cultivos celulares , productos alimenticios , vacunas . y ..., así que varios materiales biológicos de partida están disponibles.
Debido a la optimización del procedimiento de acuerdo con el material de partida, se requieren especies de ácido nucleico deseado (ADN / ARN, lineal / circular, ds / ss, largo / corto).
Hoy en día, el ensayo caracterizado por el uso de bolas magnéticas recubiertas de sílice parece ser el más común. Por lo tanto, en este artículo, "cuentas de sílice" están destinadas a significar cuentas magnéticas recubiertas de sílice a menos que se indique lo contrario.

Perlas magnéticas editar ]

Las perlas recubiertas de sílice [18] [19] [20] con frecuencia recubren diversas partículas magnéticas (portador magnético) con sílice. Las partículas de maghemita (γ-Fe 2 O 3 ) y las partículas de magnetita ( Fe 3 O 4 ), así como una partícula intermedia de óxido de hierro, son las más adecuadas como portador magnético.
En general, la calidad de las perlas magnéticas se caracteriza por los siguientes parámetros: [18] [21]
Aquí, la "facilidad de recolección" es definida y comparada por
"las perlas magnéticas se recolectan en no menos del X% en peso (~ 90% en peso) en T segundos (~ 3 segundos) en presencia de un campo magnético de Y gauss (~ 3000 gauss ) cuando se dispersa en una cantidad de al menos Z mg (20 mg) en W mL (~ 1 mL) de una solución acuosa de una muestra que contiene una sustancia biológica "
y, la capacidad de captura se define y se compara por
"unión con al menos A μg (~ 0.4μg) de la sustancia biológica por cada B mg (1 mg) de la misma cuando se dispersa en una cantidad de al menos Z mg (~ 20 mg) en W mL (~ 1 mL) de una solución acuosa de una muestra que contiene una sustancia biológica ".

Principios básicos editar ]

El principio de este método [1] [2] [3] [4] [14] se basa en las propiedades de unión al ácido nucleico de las partículas de sílice o diatomeas en presencia de este agente caotrópico, que están de acuerdo con el efecto caotrópico .
En pocas palabras, el efecto caotrópico es cuando un anión caotrópico en una solución acuosa perturba la estructura del agua y debilita la interacción hidrófoba. [22] [23]
En un sentido amplio, "agente caotrópico" significa cualquier sustancia capaz de alterar la estructura secundaria, terciaria y / o cuaternaria de proteínas y ácidos nucleicos, pero dejando al menos la estructura primaria intacta. [24]
La solución acuosa de sal caotrópica es un agente caotrópico. El anión caotrópico aumenta la entropía del sistema al interferir con las interacciones moleculares mediadas por fuerzas no covalentes, como los enlaces de hidrógeno, las fuerzas de van der Waals y los efectos hidrófobos. Ejemplos de los mismos son la solución acuosa de: ion tiocianato , ion yodo , ion perclorato , ion nitrato , ion bromo , ión de cloro , ión acetato , ión flúor , y de iones sulfato, o combinaciones mutuas con el mismo. De acuerdo con el método original del método Boom, la sal de guanidinio caotrópica empleada es, preferiblemente, tiocianato de guanidinio (GuSCN).
Según el efecto caotrópico, en presencia del agente caotrópico, el agua de hidratación de NA se toma del enlace fosfodiéster del grupo fosfato del esqueleto de una NA. De este modo, el grupo fosfato se "expone" y se forma una interacción hidrófoba entre la sílice y el grupo fosfato expuesto.

Instrumentos automatizados editar ]

Pipeta Tajima editar ]

El aparato de extracción de ácido nucleico basado en la pipeta Tajima [14] [15] (ver Fig. 2) es uno de los instrumentos más extendidos para realizar el método Boom. [25]
La pipeta Tajima fue inventada por Hideji Tajima, [14] fundador y presidente de Precision System Sciences (PSS) [25] Inc., un fabricante japonés de instrumentos de medición y precisión. La pipeta Tajima es una tecnología principal de PSS Inc. [25] PSS Inc. proporciona un producto OEM basado en esta tecnología (por ejemplo, MagNA Pure (R)) para varios fabricantes de reactivos líderes como Hoffmann-La Roche , Life Technologies , ... y así. Después de Tajima et al. [14] se presentó, las solicitudes similares como [16] también han sido presentadas por otras partes.
La pipeta Tajima realiza un método y procedimiento de control de partículas magnéticas, que pueden separar las partículas magnéticas combinadas con una sustancia objetivo del líquido por la fuerza magnética y suspenderlas en un líquido.

Configuraciones editar ]

La pipeta en sí es un aparato que comprende los siguientes miembros (ver Fig. 2). [14]
punta de pipeta configurada para poder acceder y aspirar / descargar líquido desde / hacia cada uno de los recipientes, teniendo
una parte delantera,
una porción de reservorio,
un pasaje líquido
conectando la parte del extremo frontal y la parte del depósito,
una región de separación
en el paso de líquido sometido a una acción de un campo magnético, y
un mecanismo
para aplicar una presión negativa o positiva al interior de la porción de la pipeta para extraer o descargar una sustancia magnética suspendida del líquido hacia o desde la porción de la pipeta
Fuente de campo magnético
dispuestas en el exterior y adyacentes a la punta de la pipeta; y
fuente de campo magnético que conduce el dispositivo
para impulsar la fuente del campo magnético para aplicar o eliminar un campo magnético hacia o desde la región de separación desde fuera del paso de líquido. Cuando el imán se acerca a la punta de la pipeta, se aplica un campo magnético; cuando se retira de la punta de la pipeta, se elimina ese campo magnético.
Un aparato de extracción de ácido nucleico que incorpora pipetas Tajima generalmente consiste en: [14]
La mencionada pipeta Tajima ,
Pluralidad de los tubos .
Pluralidad del soporte del tubo para los tubos antes mencionados,
Medio de transporte
para transportar la pipeta Tajima entre esa pluralidad de tubos (los tubos están soportados por el soporte del tubo), y
Dispositivo de control
Para controlar los dispositivos antes mencionados.

Mociones editar ]

(a) Captura de las perlas magnéticas. 
Durante este proceso de succión, cuando el campo magnético se aplica a la región de separación de la punta de la pipeta, desde el exterior de la punta de la pipeta, el imán está dispuesto en el exterior de la punta de la pipeta, ya que el líquido que contiene las perlas magnéticas pasa a través de una región de separación de la pipeta. En la punta, las partículas magnéticas son atraídas y detenidas en la pared interna de la región de separación de la loseta de la punta de la pipeta.
Posteriormente, cuando esa solución se descarga en las condiciones en que se ha mantenido el campo magnético, solo quedan partículas magnéticas en el interior de la punta de la pipeta. De esta manera, las partículas magnéticas se separan del líquido.
De acuerdo con Tajima, [14] la altura de succión preferible del líquido de la mezcla es tal que
el nivel inferior del líquido es más alto que el extremo inferior de la región de separación del paso del líquido (Eso significa que el nivel inferior del líquido es más alto que el extremo inferior del imán),
cuando todo el líquido de la mezcla se extrae,
para asegurar que las partículas magnéticas aspiradas puedan ser completamente detenidas.
En este momento, debido a que las partículas magnéticas están húmedas, permanecen unidas a la superficie interna de la región de separación del paso de líquido de la punta de la pipeta. Si la punta de la pipeta P se mueve o se transporta, las partículas magnéticas no se desprenden fácilmente.
(b) Re-suspensión de las perlas magnéticas capturadas.
Después de que las partículas magnéticas son detenidas por la manera mencionada anteriormente (a),
por lo que el líquido de la mezcla que se eliminó de las partículas magnéticas se descarga en la parte de alojamiento del líquido (Recipiente) y se drena, quedando solo las partículas magnéticas en la punta de la pipeta,
Podemos hacer el proceso de re-suspensión.
Re-suspensión de las perlas magnéticas capturadas son en detalle, consta de los siguientes pasos. De causa, consideramos que, el estado en el que ese material magnético ha sido capturado por la forma mencionada anteriormente.
  • Aspirar líquido como el tampón de lavado en la punta.
  • Salir de la aplicación de un campo magnético.
Al "Salir de la aplicación de un campo magnético" las partículas magnéticas se suspenden en el líquido.
  • La descarga del líquido (como el tampón de lavado) de la punta de la pipeta al recipiente (en la condición de fuerza magnética generada por el cuerpo del imán se corta).

Operaciones editar ]

Un ejemplo de las operaciones del aparato de extracción de ácido nucleico que incorpora la pipeta Tajima son, como se muestra en la Fig. 1.

Otros métodos editar ]

Ejemplos de otro tipo de método del dispositivo de captura de partículas magnéticas son los siguientes.
  • Captura tipo pluma [3] [4]
  • tipo de tubo de captura

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